Таково было положение дел, когда доктор Хольцер приступил к работе, основываясь на изысканиях коллеги Шиффа. Хольцер испытал простую практическую процедуру для измерения силы воздействия сывороток. Процесс, который он позднее широко применял в своих экспериментах, был действительно очевиден и прост. Хольцер брал фарфоровые пластинки для капельного анализа, какие используют в химии для анализа крошечного количества веществ и материалов. Фарфоровые или стеклянные пластинки выкладываются в два ряда, на каждой пластинке – четыре углубления, или ячейки. Два таких стеклышка с восемью ячейками Хольцер уложил рядом на лабораторном столе. В каждую ячейку первой пластинки он пипеткой добавил по капле физраствора поваренной соли. Затем добавил четыре капли тестовой анти-А-сыворотки, которую хотел использовать для исследования следов крови, в первую ячейку первой пластинки и тщательно «перемешал». Четыре капли получившейся смеси Хольцер перенес в следующую ячейку, так что сыворотка, смешанная с раствором поваренной соли, который находился в этой ячейке, была вполовину слабее сыворотки в первой ячейке, то есть сыворотка из первой ячейки была во второй разбавлена 1:2. В каждой последующей ячейке сыворотка была разбавлена вдвое по сравнению с предыдущей, и в последней восьмой ячейке сыворотка была разбавлена 1:256.

То же самое Хольцер повторил на второй пластинке с анти-В-сывороткой от раствора 1:1 до раствора 1:256. Теперь он приготовил две суспензии из свежих красных кровяных телец – одну с анти-А-тельцами, другую – с анти-В-тельцами. Затем в каждую ячейку с раствором анти-А-сыворотки добавил малое количество телец группы А, в каждую ячейку с раствором анти-В-сыворотки добавил то же количество телец группы В. В промежутке от 10 до 30 минут Хольцер наблюдал, в каких ячейках происходит агглютинация. Теперь он мог определить, до какой степени раствор анти-А-сыворотки и анти-В-сыворотки агглютинируют кровяные тельца, то есть в каких из восьми ячеек сыворотка сохраняет свою силу, а в каких теряет. Сильная сыворотка действовала еще и в растворе 1:256, ослабленная сыворотка действовала до раствора 1:128, 1:64 или 1:32. Но в каждом случае силу сыворотки (или ее титр, говоря научным языком) можно было определить и изучить. Обе сыворотки, чья сила была теперь ясна, Хольцер использовал для проверки кровавого пятна неизвестной группы. В две маленькие пробирки он поместил соскоб следов запекшейся крови или частички материала со следами крови, добавил туда сыворотку и 24 часа продержал пробирки в холодильнике. Затем пробирки были помещены в центрифугу, при этом излишние анти-А-сыворотка и анти-В-сыворотка снова отделились от составных частей крови запекшегося следа. Хольцер изъял излишек сыворотки из пробирок и с каждым из образцов сыворотки на двух следующих пластинках проделал то же самое, что с сывороткой в свежем нетронутом состоянии. Обе сыворотки были распределены по ячейкам в растворе разной степени от 1:1 до 1:256. Хольцер снова взял суспензии кровяных телец групп А и В, такие же, как для проверки исходной действенной силы сыворотки. Малое количество суспензий он добавил в ячейки всего ряда пластинок. Теперь Хольцер мог определить, до какой степени раствора каждая сыворотка сохраняет или теряет свое действие после смешения с кровью неизвестной группы. Если исходная анти-А-сыворотка, например, оставалась действенной до раствора 1:128, но уже не действовала при растворе 1:16 или 1:32, значит, ее сила уменьшалась в растворе третьей и четвертой степени. Это признак того, что след крови агглютинировал значительное количество анти-А-сыворотки. Если неизменной оставалась действенная сила анти-В-сыворотки, значит, след крови содержит группу А.