К 3–4 мл свежевыпущенной мочи, охлажденной до комнатной температуры, прибавляют 3–4 капли реактива Эрлиха (1 каплю на 1 мл мочи). Окрашивание жидкости в красный цвет в течение первых 30 с говорит об увеличенном содержании уробилиногена в моче; если окрашивание развивается по прошествии 30 с, то концентрация уробилина в моче нормальная, а если через 30 с окраска не развивается, то это может быть вариантом нормы или можно говорить о полном отсутствии уробилиногена в моче.

Билирубин мешает определению уробилиноидов, поэтому, если он обнаружен в моче, его следует предварительно удалить, осаждая хлоридом бария с последующим фильтрованием. Для этого к 10–12 мл мочи приливают 5–6 мл 10%-ного раствора ВаСl₂ и фильтруют. Затем фильтрат проверяют на полноту осаждения билирубина и процедуру повторяют, если первое осаждение было неполным.

Унифицированный метод с парадиметиламинобензальдегидом

Принцип метода

Уробилиноген с парадиметиламинобензальдегидом образует комплекс, окрашенный в красный цвет; интенсивность окраски пропорциональна содержанию уробилиногена. Для восстановления уробилина в уробилиноген используют аскорбиновую кислоту и гидрат окиси железа. Для увеличения специфичности реакции добавляют ацетат натрия.

Необходимые реактивы

1. 4-диметиламинобензальдегид (парадиметиламинобензальдегид).

2. НСl концентрированная; реактив Эрлиха: 0,7 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной НСl, приливают к 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтоватым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.

3. Натрия ацетат, насыщенный раствор: 375 г CH₃COONa × 3H₂O (или 226 г CH₃COONa) растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды, охлаждают до комнатной температуры. Хранят при температуре 20 °С. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным.

4. Аскорбиновая кислота.

5. Натр едкий, 0,5 г/л раствора.

6. Бария хлорид, 100 г/л раствора.

7. Фенолсульфофталеин (феноловый красный). Используют для приготовления калибровочного раствора.

8. Основной калибровочный раствор: 20 мг фенолсульфо-фталеина растворяют в 100 мл 0,5 г/л раствора едкого натра. Стабилен при хранении.

Рабочий калибровочный раствор готовят разведением основного раствора 0,5 г/л раствором едкого натра в 100 раз. Стабилен в течение недели с условием хранения при 20 °С.

Рабочий раствор содержит 0,2 мг фенолсульфофталеина в 100 мл и эквивалентен по окраске раствору уробилиногена – 0,345 мг на 100 мл. Точность приготовления можно проверить измерением оптической плотности раствора на спектрофотометре: при длине волны 562 нм оптическая плотность раствора должна быть 0,380–0,390.