Свежеприготовленную мокроту помещают в стерильную узкогорлую бутылку вместимостью 200–250 мл с хорошо пригнанной пробкой. Для флотации достаточно 10–15 мл мокроты. Ее заливают двойным объемом щелочи и энергично встряхивают в течение 10–15 мин в аппарате для встряхивания. При этом мокрота гомогенизируется, растворяются слизь и гной, освобождаются микобактерии. Затем в эту же бутылку приливают 1 мл бензина и 100 мл дистиллированной воды для разжижения мокроты. Снова встряхивают в течение 10–15 мин для эмульгирования бензина. Доливают дистиллированную воду до горлышка бутылки. Смесь оставляют при комнатной температуре на 40–50 мин. За это время капельки бензина с адсорбированными на них микобактериями всплывают, образуя в горлышке бутылки сливкообразное флотационное кольцо.

Препараты готовят на новых обезжиренных предметных стеклах, которые предварительно подогревают до 60 °С на воздушной бане. На подогретые стекла пастеровской пипеткой наносят капли из флотационного кольца, высушивают и снова наносят капли на то же место. Каждую последующую каплю наносят на высохшую предыдущую каплю. Таким образом все флотационное кольцо переносят на предметные стекла. Готовят 3–4 препарата, фиксируют и окрашивают по Цилю—Нильсену.

Люминесцентная микроскопия

Метод основан на том, что туберкулезные микобактерии, окрашенные ауромином, люминесцируют под влиянием ультрафиолетовых лучей в виде светящихся золотистых палочек (метод менее трудоемкий и более быстрый, чем предыдущие).

Для диагностики туберкулеза легких, кроме бактериоскопии мокроты, необходимо исследовать бронхиальные смывы, промывные воды желудка, плевральный экссудат, используя методы бактериоскопии, а также посев материала на специальные питательные среды, метод ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Окраска препаратов по Граму

В препаратах, окрашенных по Граму, обнаруживают пневмококки, клебсиеллы, стрептококки, стафилококки, друзы актиномицета и другие микроорганизмы.

Для этого используют:

1) карболовый раствор генцианового фиолетового (1 г генцианового фиолетового растирают в ступке с 10 мл 96%-ного этилового спирта; раствор вливают в 90 мл 2%-ного раствора фенола, хорошо перемешивают; хранят в бутылке из темного стекла);

2) раствор Люголя (1 г йода и 2 г йодата калия растворяют в 5 мл дистиллированной воды; после растворения навески доливают 295 мл дистиллированной воды);

3) 96%-ный этиловый спирт;

4) фуксин Пфейффера (10 мл карболового фуксина Циля смешивают с 90 мл дистиллированной воды).