Мазок фиксируют над пламенем горелки. На зафиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианового фиолетового на 1,5–2 мин. Все части препарата окрашиваются в фиолетовый цвет. Снимают бумажку и заливают мазок раствором Люголя на 2 мин. При этом фиолетовая окраска закрепляется на грамположительной флоре. Сливают раствор Люголя. Препарат обесцвечивают 96%-ным этиловым спиртом до сероватого цвета. Грамположительная флора фиолетовую окраску сохраняет. Промывают водой и докрашивают фуксином Пфейффера в течение 10–15 с. Все части препарата, кроме грамположительной флоры, окрашиваются в красный цвет. Снова промывают водой и высушивают на воздухе.
Микроскопируют с иммерсионной системой. На красном фоне четко видны фиолетовые грамположительные микроорганизмы. Грамотрицательная флора окрашивается в красный цвет.
Пневмококки представляют собой попарно расположенные грамположительные округлые или вытянутые диплококки, окруженные капсулой. Клебсиеллы имеют вид толстых грам-отрицательных палочек различной величины с закругленными концами, расположенных попарно и окруженных капсулой. Стрептококки представляют собой круглые, мелкие, расположенные цепочками разной длины грамположительные кокки. Находятся внутри лейкоцитов и среди них. Стафилококки – круглые грамположительные кокки различной величины, располагаются единично или группами. Часто встречаются одновременно со стрептококками.
Друзы актиномицета имеют вид сплетений темно-фиолетового цвета. Каждая нить сплетения заканчивается колбовидным утолщением, окрашенным в красный цвет.
Методы ускоренной диагностики. Путем применения молекулярно-генетических методов возможно получение анализов в течение трех суток с момента поступления образца. Тест-системы основаны на амплификации генов возбудителя туберкулеза. Их применение позволяет подтвердить принадлежность возбудителя к виду M. Tuberculosis, а также наличие/отсутствие мутации у выделенного штамма, которая можен привести к устойчивости к изониазиду и рифампицину.
Методы ускоренной диагностики.Изучение грибковой флоры в мокроте
Изучение грибковой флоры в мокроте
Иногда в окрашенном или неокрашенном препарате можно встретить различные виды грибов.
Дрожжевые грибы рода Candida – почкующиеся клетки и короткие почкующиеся нити псевдомицелия (клетки круглой или овальной формы, псевдомицелий – членистый, ветвистый, споры на нем располагаются мутовками). Наличие этих грибов в мокроте свидетельствует об их активизации, но еще не дает основания для диагноза кандидомикоза, который ставится при учете клинических данных и повторных обнаружениях грибов.