Второй случай произошел ровно через неделю, 16 июля 1576 года, с сестрой герцога, Изабеллой Медичи. Единственная выжившая дочь Козимо I Медичи была радостью своего отца: умная, красивая, очень похожая на свою мать Элеонору Толедскую. В возрасте 11 лет она уже была помолвлена с князем Паоло Джордано Орсини, а в возрасте 16 лет ее выдали за него замуж. Супруги жили в Риме, но после смерти матери Изабелла часто приезжала во Флоренцию ухаживать за одиноким отцом, который в ней души не чаял. Она устраивала блестящие приемы, на которые собирались все интеллектуалы Флоренции. За это Изабеллу называли «звезда дома Медичи».

Дальше история Изабеллы почти совпадает с историей дона Педро и Элеоноры Альварес ди Толедо. Ее муж Паоло Орсини был под стать ее брату дону Педро – грубый, необразованный, развратный. Принцесса не любила супруга, но понимала, что такое династический брак. У них родился сын Вирджинио, после чего Орсини начал откровенно пренебрегать женой. У него было много женщин, но однажды он влюбился в замужнюю даму незнатного происхождения по имени Виттория Аккорембони, которая ответила ему взаимностью. Этого гордая красавица Изабелла уже стерпеть не могла и пожаловалась своему брату, герцогу Франческо I. Ответ был краток: терпи и смирись. Когда муж изменяет – это нормально, перебесится и вернется.

Но принцесса терпеть не собиралась и тоже нашла свою любовь – им стал двоюродный брат мужа, Троило Орсини. Когда Паоло узнал об этом, он впал в бешенство и задумал убить жену и ее любовника. А заодно и прикончить мужа Виттории, чтобы жениться на ней. Изабелла осознала опасность, ужаснулась и бросилась за помощью сначала во Флоренцию к брату Франческо – но он только развел руками и предложил помириться с мужем. Тогда она обратилась за помощью к Екатерине Медичи и попросила убежища в Париже. Сердобольная Екатерина согласилась принять родственницу, но приглашение пришло слишком поздно: Орсини сначала убил Троило в Риме, затем приехал во Флоренцию и вынудил жену поехать с ним на охотничью виллу Медичи в Черрето Гвиди. Там он задушил жену шнуром с молчаливого согласия ее брата герцога. Так умерла в возрасте 33 лет «звезда дома Медичи», любимая дочь Козимо I Изабелла.

В 1581 году муж Виттории Аккорембони был убит недалеко от собственного дома при невыясненных обстоятельствах. Но никто даже не сомневался, что это дело рук Паоло Орсини. После этого убийства они с Витторией бежали в Северную Италию: сначала в Венецию, затем в городок Абано и Сало. Орсини боялся преследований со стороны папского правосудия, а также со стороны герцога Тосканского – он думал, что Франческо решит отомстить за убийство своей сестры. Паоло женился на Виттории Аккорембони только в 1585 году, но его здоровье уже было подорвано нездоровым образом жизни: он слишком много ел и увлекался алкоголем, сильно располнел, его мучило высокое давление и болезни. Орсини скончался в ноябре 1585 года, вскоре после бракосочетания. По слухам, его отравили шпионы Франческо I Медичи, но это не доказано. Паоло Джордано завещал своей второй жене все, что у него было: деньги, драгоценности, движимое и недвижимое имущество.