Контроль на мутность сыворотки ставят для каждого опыта.

Измерение экстинкции производят на ФЭКе при зеленом светофильтре (500–560 нм) против воды в кювете с толщиной слоя в 5 мм. Из показателей общего и прямого билирубина вычитают показатель контроля. Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и прямого билирубина. Для определения непрямого билирубина из общего вычитают прямой билирубин.

Построение калибровочного графика удобно производить с помощью набора «Билирубин-эталон» (фирма «Лахема», Чехия). Набор содержит лиофилизированный (сухой) билирубин, альбумин и инструкцию по построению графика.

Результаты выражают в миллиграммах на литр. Для этого концентрацию билирубина, найденную по графику, умножают на 2000, так как для исследования было взято 0,5 мл сыворотки. Коэффициент пересчета в единицы СИ (мкмоль/л) равен 1,7104. В норме содержание общего билирубина – 8,5–20,5 мкмоль/л.

По соотношению концентрации билирубина в порциях С и В судят о концентрационной способности желчного пузыря (с учетом возможности снижения ее в порции В при разведении желчи воспалительным экссудатом). В норме в порции В содержится 3,4–6,8 ммоль/л (200–400 мг%), а в порции С – 0,17–0,34 ммоль/л (10–20 мг%) билирубина.

Цветная реакция Либермана и Бурхарда. С помощью этого метода производят количественное определение холестерина в желчи. Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает зеленое окрашивание.

Для этого используют:

1) смесь из 1 части ледяной уксусной кислоты, 5 частей уксусного ангидрида и 1 части концентрированной серной кислоты; смесь должна быть бесцветной или желтоватой; хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике;

2) стандартный раствор холестерина – 1800 мг/л (180 мг холестерина растворяют в 2,5 мл хлороформа в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят до метки абсолютным спиртом); раствор хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой, которую парафинируют; 1 мл раствора содержит 1,8 мг холестерина.

К 2,1 мл смеси реактивов (1) добавляют 0,1 мл исследуемого материала (желчи). Пробирку энергично встряхивают 10–12 раз и ставят в термостат на 10 мин при температуре 37 °С. Измерения производят на ФЭКе против реактива 1 при красном светофильтре (630–690 нм) в кювете с толщиной слоя в 5 мм.

Расчет ведут по калибровочному графику.

Для калибровочного графика готовят из основного стандартного раствора холестерина (2) ряд разведений (табл. 32).

Таблица 32